Perbedaan antara urutan Microarray dan RNA | Microarray vs RNA Sequencing

Perbedaan Kunci - Rangkaian Microarray vs RNA

Transcriptome mewakili keseluruhan isi RNA yang ada dalam sel termasuk mRNA, rRNA, tRNA, RNA terdegradasi, dan RNA yang tidak terdegradasi. Profil transkripome merupakan proses penting untuk memahami wawasan sel. Ada beberapa metode lanjutan untuk pembuatan profil transkrip. Urutan Microarray dan RNA adalah dua jenis teknologi yang dikembangkan untuk menganalisis transkriptom. Perbedaan utama antara urutan microarray dan RNA adalah bahwa microarray didasarkan pada potensi hibridisasi dari probe berlabel yang diprioritaskan dengan urutan cDNA target sementara sekuens RNA didasarkan pada urutan langsung untaian cDNA dengan teknik sekuensing lanjutan seperti NGS. Microarray dilakukan dengan pengetahuan sebelumnya tentang urutan dan urutan RNA dilakukan tanpa sepengetahuan sebelumnya tentang urutan.

DAFTAR ISI

1. Ikhtisar dan Perbedaan Kunci

2. Apa itu Microarray

3. Apa RNA Sequencing

4. Side by Side Comparison - Ritel Microarray vs RNA

5. Ringkasan

Apa itu Microarray?

Microarray adalah metode throughput yang kuat, andal dan tinggi yang digunakan untuk pembuatan profil transkriptom oleh para ilmuwan. Ini adalah pendekatan yang paling populer untuk analisis transkrip. Ini adalah metode biaya rendah, yang bergantung pada probe hibridisasi.

Teknik ini dimulai dengan ekstraksi mRNA dari sampel dan konstruksi perpustakaan cDNA dari total RNA. Kemudian dicampur dengan probe predesigned dengan fluoresen pada permukaan padat (matriks spot). Rangkaian komplementer digabungkan dengan probe berlabel di microarray. Kemudian microarray dicuci dan disaring, dan gambarnya diukur. Data yang dikumpulkan harus dianalisis untuk mendapatkan profil ekspresi relatif.

Intensitas probe microarray diasumsikan sebanding dengan jumlah transkrip dalam sampel. Namun, keakuratan teknik ini tergantung pada probe yang dirancang, pengetahuan awal tentang urutan dan afinitas probe untuk hibridisasi. Oleh karena itu teknologi microarray memiliki keterbatasan. Teknik microarray tidak bisa dilakukan dengan transkrip nilai kelimpahan yang rendah. Ini gagal untuk membedakan isoform dan mengidentifikasi varian genetik. Karena metode ini bergantung pada hibridisasi probe, beberapa masalah yang terkait dengan hibridisasi seperti hibridisasi silang, hibridisasi nonspesifik, dll.terjadi dalam teknik microarray.

Gambar 01: Microarray

Apa itu RNA Sequencing?

RNA shotgun sequencing (RNA seq ) adalah teknik sekuens transkopi keseluruhan yang baru dikembangkan. Ini adalah metode throughput transkrip yang cepat dan tinggi. Ini secara langsung mengkuantifikasi ekspresi gen dan menghasilkan penyelidikan mendalam tentang transkriptom. RNA seq tidak bergantung pada probe yang telah ditentukan sebelumnya atau pengetahuan awal dari rangkaian. Oleh karena itu, metode RNA seq memiliki sensitivitas tinggi dan kemampuan mendeteksi gen baru dan varian genetik.

Metode pengurutan RNA dilakukan melalui beberapa langkah. Total RNA sel harus diisolasi dan terfragmentasi. Kemudian, dengan menggunakan reverse transcriptase, sebuah perpustakaan cDNA harus disiapkan. Setiap untai cDNA harus diligasi dengan adaptor. Kemudian fragmen ligasi harus diperkuat dan dimurnikan. Akhirnya menggunakan metode NGS, urutan dari cDNA harus dilakukan.

Gambar 02: RNA Sequencing

Apa perbedaan antara urutan Microarray dan RNA?

- diff Article Middle before Table ->

Microarray vs RNA Sequencing
Microarray adalah metode throughput yang tangguh dan dapat diandalkan.	RNA sequencing adalah metode throughput yang akurat dan tinggi.
Biaya
Ini adalah metode biaya rendah.	Ini adalah metode yang mahal.
Analisis Sejumlah Besar Sampel
Ini memfasilitasi analisis sejumlah besar sampel secara bersamaan.	Ini memfasilitasi analisis sejumlah besar sampel.
Analisis Data
Analisis data bersifat kompleks.	Data lebih banyak dihasilkan dalam metode ini; Oleh karena itu, prosesnya lebih kompleks.
Pengetahuan Awal tentang Urutan
Metode ini didasarkan pada probe hibridisasi, jadi pengetahuan sebelumnya tentang urutan diperlukan.	Metode ini tidak bergantung pada pengetahuan urutan sebelumnya.
Variasi Struktural dan Gen Novel
Metode ini tidak dapat mendeteksi variasi struktural dan gen baru.	Metode ini dapat mendeteksi variasi struktural seperti gen fusing, splicing alternatif, dan gen baru. Sensitivitas
Ini tidak dapat mendeteksi perbedaan ekspresi isoform, jadi sensitivitas ini terbatas.
Ini memiliki kepekaan tinggi.	Hasil
Ini hanya bisa menghasilkan tingkat ekspresi relatif. Ini tidak memberikan kuantifikasi absolut ekspresi gen.
Ini memberi tingkat ekspresi absolut dan relatif.	Reanalisis Data
Ini perlu diulang kembali untuk reanalyze.
Data sekuensing dapat dianalisis ulang.	Kebutuhan akan Personil dan Infrastruktur Khusus
Infrastruktur dan personil khusus tidak diperlukan untuk microarray.
Infrastruktur dan personil khusus yang dibutuhkan oleh rangkaian RNA. Teknik-teknik Microarray memiliki masalah teknis seperti hibridisasi silang, hibridisasi nonspesifik, tingkat deteksi yang terbatas dari probe individu, dan sebagainya.	Teknik RNA seq menghindari masalah teknis seperti hibridisasi silang, hibridisasi nonspesifik, terbatas tingkat deteksi probe individu, dll.
Biases
Ini adalah metode yang bias karena bergantung pada hibridisasi.	Bias rendah dibandingkan dengan microarray.
Ringkasan - Mikroarray vs RNA Sequencing
Metode pengurutan Microarray dan RNA adalah platform throughput yang tinggi yang dikembangkan untuk pembuatan profil transkrip. Kedua metode tersebut menghasilkan hasil yang sangat berkorelasi dengan profil ekspresi gen. Namun, urutan RNA memiliki kelebihan dibandingkan analisis ekspresi genar microarray. Pengurutan RNA adalah metode yang lebih sensitif untuk mendeteksi transkrip kelimpahan rendah daripada microarray. Sekuensing RNA juga memungkinkan diferensiasi antara isoform dan identifikasi varian gen. Namun, microarray adalah pilihan umum kebanyakan peneliti karena urutan RNA adalah teknik baru dan mahal dengan tantangan penyimpanan data dan analisis data yang kompleks.	Referensi:

1. Wang, Zhong, Mark Gerstein, dan Michael Snyder. "RNA-Seq: alat revolusioner untuk transkripsi. "Ulasan alam Genetika. U. S. Perpustakaan Nasional Kedokteran, Jan. 2009. Web. 14 Mar. 2017

2. Rogler, Charles E., Tatyana Tchaikovskaya, Raquel Norel, Aldo Massimi, Christopher Plescia, Eugeny Rubashevsky, Paul Siebert, dan Leslie E. Rogler. "RNA expression microarrays (REMs), metode throughput tinggi untuk mengukur perbedaan ekspresi gen pada beragam sampel biologis. "Penelitian Asam Nukleat. Oxford University Press, 01 Jan. 2004. Web. 15 Mar. 2017

3. Zhao, Shanrong, Wai-Ping Fung-Leung, Anton Bittner, Karen Ngo, dan Xuejun Liu. "Perbandingan RNA-Seq dan Microarray dalam Profil Transkripsi Profil Sel Teraktif. "PLOS SATU. Perpustakaan Umum Ilmu Pengetahuan, Januari 2014. Web. 15 Mar. 2017

Gambar Courtesy:

1. "Jurnal. pcbi 1004393. g002 "Oleh Malachi Griffith, Jason R. Walker, Nicholas C. Spies, Benjamin J. Ainscough, Obi L. Griffith - (CC BY 2. 5) via Commons Wikimedia

2. "Microarray" Oleh Bill Branson (Fotografer) - National Cancer Institute (Domain Publik) melalui Commons Wikimedia