Perbedaan antara SDS Page dan Western Blot | SDS Page vs Western Blot

Perbedaan Kunci - Halaman SDS vs Western Blot

Western blotting adalah teknik yang mendeteksi protein spesifik dari sampel protein. Teknik ini dilakukan melalui beberapa langkah kunci: elektroforesis gel, blotting, dan hibridisasi. Sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis (SDS Page) adalah sejenis teknik elektroforesis gel yang digunakan untuk memisahkan protein sesuai dengan ukurannya (bobot molekul). Western blot adalah selembar khusus dari membran blotting yang digunakan untuk mentransfer pola protein yang sama di SDS Page. Perbedaan utama antara SDS Page dan western blot adalah bahwa SDS Page memungkinkan pemisahan protein dalam campuran sementara western blot memungkinkan deteksi dan kuantifikasi protein spesifik dari campuran. Keduanya berguna dalam penelitian analisis protein.

DAFTAR ISI

1. Ikhtisar dan Perbedaan Kunci

2. Apa itu SDS Page

3. Apa itu Western Blot

4. Perbandingan Side by Side - Halaman SDS vs Western Blot

5. Ringkasan

Apakah itu Halaman SDS?

SDS Page adalah teknik elektroforesis gel yang digunakan untuk pemisahan protein. Hal ini biasa digunakan dalam biokimia, genetika, forensik dan biologi molekular. Setelah protein diekstraksi dari sampel, protein tersebut dijalankan pada gel yang terdiri dari SDS dan poliakrilamida. SDS adalah deterjen anionik yang digunakan untuk protein linier (protein denaturasi) dan untuk memberi muatan negatif pada protein linier yang sebanding dengan massa molekulnya. Poliakrilamida menjadi pendukung padat gel. Protein denaturasi yang bermuatan negatif bermigrasi menuju ujung positif aparatus melalui gel. Menurut ukuran protein, kecepatan migrasi berbeda di antara protein dan pemisahan terjadi. Oleh karena itu, halaman SDS berguna untuk pemisahan protein individu berdasarkan ukurannya.

Pembuatan gel poliakrilamida untuk fraksinasi protein merupakan langkah penting dalam SDS Page. Konsentrasi poliakrilamida yang benar dan jenis zat penghubung silang yang digunakan sangat mempengaruhi sifat fisik gel, yang membuat pemisahan sebenarnya dari protein yang berbeda. Ukuran pori gel harus dikelola dengan baik untuk pemisahan yang efektif. Namun, SDS Page dianggap sebagai teknik pemisahan protein resolusi tinggi.

Teknik SDS Page memiliki keterbatasan dalam analisis protein. Karena SDS mendemonstrasikan protein sebelum pemisahan, ia tidak memungkinkan pendeteksian aktivitas enzimatik, interaksi pengikatan protein, kofaktor protein, dll.

Gambar 01: Halaman SDS

Apa itu Western Blot?

Teknik blotting Barat memungkinkan deteksi protein spesifik dari campuran protein dan pengukuran kuantitas dan berat molekul protein. Western blot adalah membran yang digunakan selama prosedur blotting untuk mendapatkan bayangan cermin dari pola protein pada gel SDS-poliakrilamid. Membran yang digunakan untuk blotting barat sebagian besar terdiri dari nitroselulosa atau polivinilidena difluorida (PVDF). Membran dengan protein yang ditransfer dapat digunakan untuk mengidentifikasi protein yang diinginkan. Ini memerlukan antibodi berkualitas tinggi untuk mendeteksi protein yang diinginkan melalui hibridisasi. Antibodi tersebut mengikat antigen spesifiknya dan menunjukkan adanya antigen yang diinginkan yang merupakan protein.

Mentransfer protein dari gel poliakrilamida SDS ke blot barat dilakukan dengan electroblotting. Ini adalah metode yang efektif dan cepat yang menyebabkan protein mengeluarkan elektroforesis dari gel dan melewati membran nitroselulosa (western blot).

Gambar 02: Western Blot

Apa perbedaan antara SDS Page dan Western Blot?

- diff Article Middle before Table ->

SDS Page vs Western Blot
SDS Page adalah teknik elektroforesis gel.	Western blot adalah teknik yang dilakukan pada membran untuk mendeteksi protein tertentu dari campuran.
Gunakan
halaman SDS memungkinkan pemisahan protein sesuai ukurannya.	Western blot memungkinkan transfer protein pada gel halaman SDS tanpa mengubah pola dan memungkinkan hibridisasi dengan antibodi spesifik.
Kekurangan
Penurunan denaturasi protein, biaya tinggi, dan kehadiran bahan kimia neurotoksin adalah kerugian dari teknik ini.	Teknik ini memakan waktu dan membutuhkan kondisi penguasaan pribadi dan spesifik yang baik.

Ringkasan - Halaman SDS vs Western Blot

Halaman SDS dan western blot adalah dua metode yang terlibat dalam analisis protein. SDS Page memungkinkan pemisahan protein dengan mudah sesuai dengan berat molekulnya. Western blot membantu mengonfirmasi keberadaan dan kuantitas protein tertentu melalui hibridisasi dengan antibodi spesifik. Ini adalah perbedaan antara SDS Page dan western blot.

Referensi:

1. Blancher, C., dan A. Jones. "SDS -PAGE dan Western Blotting Techniques. "Metode dalam kedokteran molekuler. Perpustakaan Nasional U. S., n. d. Web. 27 Mar. 2017

2. Nowakowski, Andrew B., William J. Wobig, dan David H. Petering. "Native SDS-PAGE: Pemisahan Elektroforesis Resolusi Tinggi Protein Dengan Retensi Properti Asli Termasuk Ion Logam Terikat. "Metallomics: ilmu biometal terpadu. U. S. Perpustakaan Nasional Kedokteran, Mei 2014. Web. 27 Mar. 2017.

Gambar Courtesy:

1. "Elektroforesis SDS-PAGE" Oleh Bensaccount di Wikipedia bahasa Inggris (CC BY 3. 0) via Commons Wikimedia

2. "Western blot 114A" Oleh Amanthabagdon - Memiliki pekerjaan (Public Domain) melalui Commons Wikimedia